El kit ELISA es basa en la fase sòlida de l'antigen o anticos i l'etiquetatge enzimàtic de l'antigen o anticossos. L'antigen o l'anticòs unit a la superfície del transportador sòlid encara conserva la seva activitat immunològica, i l'antigen o anticossos marcat amb l'enzim conserva tant la seva activitat immunològica com l'activitat enzimàtica. En el moment de la determinació, la mostra a prova (en la qual es mesura l'anticòs o l'antigen) reacciona amb l'antigen o l'anticòs a la superfície del transportador sòlid. El complex antigen-anticossos format sobre el suport sòlid es separa d'altres substàncies del líquid mitjançant el rentat.
S'afegeixen antígens o anticossos marcats amb enzims, que també s'uneixen al transportador sòlid per reacció. En aquest moment, la quantitat d'enzim en la fase sòlida és proporcional a la quantitat de substància de la mostra. Després d'afegir el substrat de la reacció enzimàtica, el substrat és catalitzat per l'enzim per convertir-se en productes de color. La quantitat del producte està directament relacionada amb la quantitat de la substància provada a l'espècimen, de manera que es poden realitzar anàlisis qualitatives o quantitatives segons la profunditat del color.
L'alta eficiència catalítica dels enzims amplifica indirectament els resultats de la resposta immune, fent que l'assaig sigui molt sensible. ELISA es pot utilitzar per determinar antígens, però també es pot utilitzar per determinar anticossos.
Principis bàsics del kit ELISA
Utilitza la reacció específica de l'antigen i l'anticossos per connectar l'objecte a l'enzim, i després produeix una reacció de color entre l'enzim i el substrat per a la determinació quantitativa. L'objecte de mesura pot ser l'anticossos o l'antigen.
Hi ha tres reactius necessaris en aquest mètode de determinació:
â Antigen o anticossos en fase sòlida (adsorbent immune)
â¡ Antigen o anticòs marcat amb enzims (marcador)
⢠substrat per a l'acció enzimàtica (agent de desenvolupament del color)
En la mesura, l'antigen (anticòs) s'uneix primer al transportador sòlid, però encara conserva la seva activitat immune, i després s'afegeix un conjugat (marcador) d'anticossos (antigen) i enzim, que encara conserva la seva activitat immune i l'enzim originals. activitat. Quan el conjugat reacciona amb l'antigen (anticossos) del portador sòlid, s'afegeix el substrat corresponent de l'enzim. És a dir, hidròlisi catalítica o reacció REDOX i color.
La tonalitat de color que produeix és proporcional a la quantitat d'antigen (anticossos) a mesurar. Aquest producte de color es pot observar a ull nu, microscopi òptic, microscopi electrònic, també es pot mesurar per espectrofotòmetre (instrument d'etiqueta enzimàtica). El mètode és senzill, còmode, ràpid i específic.